نحوه استفاده از تفنگ ژنی

1. آماده سازی مواد

یک لایه نازک از محیط در یک ظرف کشت 9 سانتی متر قرار داده شد و مواد (معمولا جنین های نابالغ، جنین بالغ، کالوس کوچک، سلول های تعلیق، پروتوپلاست ها و ...) در مرکز ظرف با قطر 3 سانتی متر .

2، درمان پودر طلا

پودر طلای 60 میلی گرم و یا پودر تنگستن را در یک لوله سانتریفیوژ قرار دهید، 1 میلی لیتر اتانول کامل اضافه کنید، به مدت 3 دقیقه به خوبی لقی کنید، برای 1 لیتر روی 9615 گرم سانتریفیوژ کنید، محلول سوپرناتان را اضافه کنید، 1 میلی لیتر آب استریل اضافه کنید و به خوبی 96 لیتر بنوشید، تکرار کنید. بار. در نهایت، پودر طلا در 1 میلی لیتر آب مقطر استریل و در دمای 4 درجه سانتیگراد ذخیره شد.

3، پردازش DNA

پودر آویز پودر 50tA را بکشید، محلول 5 پلاسمید DNA (1.0 / lg ~ 1)، 50/1 را اضافه کنید

0.1 مول / ليتر اسپرميدين (محلول مورد استفاده استريل استريليزه شده است)، به مدت 3 دقيقه تکان داده شده، در دماي اتاق 10 دقيقه باقيمانده، در سانتريفيوژ در دماي 9615 گرم به مدت 10 ثانيه، سوپرناتانت را دور بريزيد؛ اضافه کردن 250 ~ 1 اتانول مطلق، تکان دادن به سانتریفیوژ در 9615 گرم به مدت 10 ثانیه و سوپرناتان را دور بریزید. پلت 1/160/1 از اتانول مطلق مجددا تزریق شد و برای 5 عکس (10 تا 1 در هر ضربه) مورد استفاده قرار گرفت.

4، بهره برداری از تفنگ ژن

تمام عملیات تفنگ ژنی تحت شرایط آسپتیک انجام می شود به شرح زیر است:

1) سطح تفنگ ژن و اتاق نمونه با 70 درصد اتانول را ضد عفونی کنید. در عین حال، سد مانع و دیسک برش، حامل میکرو الاستیک، دارنده آن و ابزار ثابت برای مدت 15 دقیقه با 70 درصد اتانول خیس شد و سپس روی یک نیمکت تمیز برای خشک کردن گذاشت. دیافراگم قابل جدا شدن، پوشش ثابت و دستگاه پرتاب کننده حامل میکرو الاستیک می تواند سطح با استنشاق 70 درصد اتانول و دمیدن خشک شود.

2) اسلاید میکروکاغذ را در حلقه نگهدارنده قرار دهید و مخلوطی از DNA و پودر طلایی را به مرکز اسلایدهای میکروپروسسور اضافه کنید و برای مدت 1 دقیقه خشک کنید.

3) غشاء لرزان را بر روی نگهدارنده آن نصب کنید و آن را به سمت شتاب دهنده گاز بچرخانید.

4) حلقه فضایی، شبکه مسدود کننده، نگهدارنده خالص مسدود، حامل ذرات و حلقه ثابت (صورت با ذرات رو به پایین) را نصب کنید، پوشش را تسریع کنید و آن را به چنگک بزنید.

5) نمونه را در محفظه بمباران قرار دهید و درب را ببندید.

6) دریچه اصلی سیلندر هلیوم را باز کنید و سوپاپ رگولاتور هلیوم را به سمت عقب بچرخانید تا نشانگر نشانگر فشار سنج بالاتر از فشار دیافراگم 200Psi (= 1.379MPa) باشد.

7) سوئیچ ژن و ترانسفورماتور را روشن کنید.

8) دکمه خلاء را فشار دهید. هنگامی که خلاء 26-28 هیدروژن (= 88.05 ~ 94.82kPa) باشد، دکمه ی Hold را به سرعت فشار دهید، سپس دکمه ی راه اندازی را فشار داده و نگه دارید تا فعال شود.

9) کلید مجدد را برای بازنشانی نمونه بعد از اینکه جدول خلاء صفر شده است، فشار دهید.

10) خاموش شدن

سوئیچ اصلی سیلندر هلیوم را بچرخانید، یک اسلحه خالی را بچرخانید، نشانگر فشار سنج را به صفر برسانید، سپس شیر تنظیم تنظیم فشار سنج را به عقب به عقب بچرخانید. سوئیچ اصلی اسلحه ژن و سوئیچ ترانسفورماتور را خاموش کنید.